Bu endonuceleases necə həyata durmaq
Məhdudlaşdırma fermentləri haqqında nə qədər bilirsiniz? Bu araşdırma ilə nə etdikləri və nəyə görə vacib olduğuna dair daha yaxşı anlaşma əldə edin.
Məhdudlaşdırma fermentlərini müəyyənləşdirmək
Məhdudiyyət endonükleazları DNT molekullarını kəsən bir ferment sinfidir. Hər bir ferment DNT zəncirində nükleotidlərin nadir bir ardıcıllığı tanıyır. Belə ardıcıllıqlar ümumiyyətlə 4-dən 6-a qədər baza cütüdür. Ardıcıllıqlar palindromikdir ki, tamamlayıcı DNT şeridi yalnız ardıcıllıqla eyni sıraya malikdir.
Başqa sözlə, hər iki DNT də eyni yerdə kəsilir.
Bu fermentlərin tapıldığı yerlər
Məhdudlaşdırma fermentləri, onların bioloji rolu hüceyrə müdafiə iştirak etmək olduğu bir çox müxtəlif bakteriyaların suşlarında tapılır. Bu fermentlər hüceyrəyə daxil olan xarici (məsələn, viral) DNT məhdudlaşdırmaqla "məhdudlaşdırır". Ev sahibi hüceyrə öz məhdudlaşdırıcı fermentləri üçün xüsusi yerlərdə öz DNT-i metilatlaşdıraraq məhv edən bir məhdudiyyət-modifikasiya sisteminə malikdir və bununla onu parçalamaqdan qoruyur. 100-dən çox müxtəlif nükleotid sekansını tanıyan 800-dən çox tanınmış ferment aşkar edilmişdir.
Biotexnologiyada istifadə edin
Biotexnologiyada məhdudlaşdırma fermentləri fərdlər arasındakı fragment uzunluğu fərqlərini öyrənmək üçün DNT-ni daha kiçik liflərə ayırmaq üçün istifadə olunur (Restriction Fragment Length Polymorphism - RFLP). Gen klonlama üçün də istifadə edilir.
RFLP üsulları , fərdlərin və ya fərdlərin qruplarının gen seksiyalarında fərqli fərqlərə və genomun müəyyən sahələrində məhdudiyyət yarılma nümunələrinə sahib olduğunu təyin etmək üçün istifadə edilmişdir.
Bu unikal sahələri bilmək DNT barmaq izi üçün əsasdır. Bu üsulların hər biri DNA fragmentlərinin ayrılması üçün agaroz jel elektroforezindən asılıdır. Tris bazasından, borik turşusundan və EDTA'dan meydana gələn TBE tamponu, DNA məhsullarını araşdırmaq üçün yaymaqla agaroz jeli elektroforezində istifadə edilir.
Məhdudlaşdırma fermentlərinin növləri
Üç müxtəlif növ məhdudiyyətli fermentlər var. Tip I, təsadüfi yerlərdə DNA-nı tanınma sahəsindən 1000 və ya daha çox əsas cütlüyə qədər kəsdirir. Tip III, saytdan təxminən 25 əsas cütlə kəsilir. I və III tipləri ATP tələb edir və bir çox alt birləşmələri olan böyük fermentlər ola bilər. Əsasən biotexnologiyada istifadə edilən Tip II fermentlər, ATP-yə ehtiyac olmadan, tanınmış ardıcıllıqla DNT-ni kəsdi və daha az və daha azdır.
Tip II məhdudlaşdırma fermentləri, təcrid olunmuş bakteriya növlərinə görə adlanır. Məsələn, EcoRI enzimi E. coli'den təcrid olunmuşdur. Xalqın əksəriyyəti qida ilə E. coli epizodlarını tanıyır .
Tip II məhdudlaşdırma fermentləri, tanınma sırasının mərkəzində hər iki ipi və ya hər bir strandı tanınma sekansının bir ucuna yaxınlaşdırdıqlarına görə iki müxtəlif növ kəsici yarada bilər.
Köhnə kəsik heç bir nükleotid itkisi olmayan "künc bitəri" meydana gətirəcəkdir. Sonuncu "yapışqan" və ya "əlaqəli" nəticələr yaradır, çünki DNT-nin hər bir parçası digər parçaları övgüləndirən bir səsə malikdir. Hər ikisi də rekombinant DNT və zülalların hazırlanmasında molekulyar genetikada faydalıdır.
DNT-nin bu forması ilk növbədə bir-birinə bənzəməyən iki və ya daha çox müxtəlif ipliklərin bağlanmasını (bir-birinə bənzər) istehsal etdiyi üçün önə çıxır.