Enzim kinetiğinin ölçülməsi
Bir az fon kimi, fermentlər reaksiya üçün aktivasiya enerjisinin məbləğini azaltmaq üçün katalizatorlar kimi çıxış edən zülallardır. Aktivasiya enerjisi, reaksiyaların reallaşması üçün lazım olan enerjidir, çünki bir çox reaksiyalar termodinamik mümkün olduqda çox tez (və ya baş vermir) baş vermir.
Enzimler, reaktantların bağlama və ürünlerin üretilmesine reaksiya verdiyi xüsusi bir yerde (aktif site olaraq bilinir) xüsusi reaksiyonları katalize edir. Substratların yalnız özləri üçün xüsusi olan aktiv saytlar var, belə ki, heç bir digər maddələr həmin saytda səmərəsiz və reaksiya verə bilməzlər. Bir kilid və açar kimi, hər bir ferment yalnız bir xüsusi reaksiyanı (bəzi istisnalarla) kataliz edəcəkdir.
Spesifik aktivlik, təmizlənmə faizini göstərmək üçün zülal izolyasiya metodlarında istifadə olunur. Ən az fermentin əldə etdiyini göstərmək üçün fermentlərin alınması zamanı bu bölməni bilmək vacibdir.
Ferment kinetiğinin ölçülməsi zamanı (fermentin bir substratla və ya səthlə reaksiya dərəcəsi) fermentin hazırlanmasında, birləşmə formasında hazırlanan zülalın miqdarı (reaksiyalar katalizli) olan substratın miqdarı kimi müəyyən edilir.
Xüsusi fəaliyyət nümunəsi:
- Təmizlənmiş fermentin spesifik fəaliyyəti təmizlənmədən əvvəl 150 umol / min / mq protein və təmizlənmədən sonra 800 umoles / min / mq ölçülmüşdür.
Xüsusi fəaliyyət ferment təmizliyinin əhəmiyyətli bir ölçüsüdür. Saf bir fermentin müxtəlif qrupları eyni dəyərlərə sahib olmalıdır və hətta bir ferment həllinin müxtəlif ferment aktivlik dəyərləri olmasına baxmayaraq, bir neçə dəfə eyni spesifik aktivlik dəyərlərinə malik olmalıdırlar. Bunun səbəbi, spesifik aktivliyin hesablanması zamanı ədədiator (ədəd / ml) və məxrəc (mq / ml) bərabər təsir göstərir.
Xüsusi fəaliyyət fəaliyyətdən çox fərqlidir, lakin müəyyən fəaliyyətin hesablanması hələ də fəaliyyət dəyərindən asılıdır. Yəni göstərilən spesifik aktivlik dəyəri də ferment vahidi tərifinə asılı olacaq deməkdir.
Gözlənilən spesifik aktivlik dəyərindən aşağı olan fermentlərin bantları çürüklərlə dəyişmiş və ya qarışdırılmış ferment molekullarını ehtiva edə bilər.
Enzim aktivitesini təsir edən amillər
Müxtəlif laboratoriyalarda ölçüldüyü zaman bir fermentin fərqli ölçülmüş aktivlik dəyərləri ola bilməsi mümkündür (yəni fərqli vahid təriflərin istifadəsi nəticəsində ortaya çıxan fərqlər deyil, ölçülmüş fəaliyyətdə real fərqlər).
Bir analizin aparılması üsulu (fermentlərin təmizliyini müəyyənləşdirmək üçün test üsulu) hesabat verilən fəaliyyət dəyərlərinə təsir edəcəkdir. Məsələn, fermentlər, ümumiyyətlə, 37 dərəcə selsi ilə 20 dərəcə selsi ilə müqayisədə daha aktivdirlər. Beləliklə, 21 dərəcə Selsi-də bir sınaq keçirildikdə, dəyərlər 32 dərəcə Selsi temperaturu (adətən, testlər 20-37 dərəcə Selsi arasında bir temperaturda aparılır).
Beləliklə, 1 ədəd (U) standart şərtlər altında dəqiqədə 1 nmol substratın reaksiyasını katalizləyən ferment miqdarı kimi ferment birliyinin tərifi daha yaxşı ifadə ediləcəkdir.