Bu tampon DNT-nin elektroforez ayırması üçün istifadə olunur
TBE tamponu, məhdudlaşdırma enzim digestlərinin kiçik məhsulları kimi kiçik DNA parçaların (MW <1000) ayrılması üçün xüsusilə faydalıdır.
TBE daha böyük bir tamponlama qabiliyyətinə malikdir və TAE tamponundan daha kəskin qətnamə verəcəkdir. TAE tamponu Tris bazasından, sirkə turşusundan və EDTA'dan (Tris-asetat-EDTA) ibarət olan bir həlldir.
TBE ümumiyyətlə TAE-dən daha bahalı və DNT-nin təmizlənməsi və bağlama mərhələləri nəzərdə tutulduqda problemlərə səbəb ola bilən DNT liqazını inhibə edir. Aşağıdakı üç sadə addım ilə TBE tamponunun necə alınacağını öyrənin. Bu tampon yaratmaq üçün təxminən 30 dəqiqə çəkməməlidir. İşdə necə:
EDTA'nın Fond Çözümünü Hazırlayın
Bir EDTA (etilendiamin tetraasetik turşusu) həlli əvvəlcədən hazırlanmalıdır. PH 8.0 qədər tənzimlənməyincə, EDTA tamamilə həll olunmaz. 0.5 M EDTA 500 ml'lik bir stock həlli üçün 93.05 qram EDTA disodyum tuzu (FW = 372.2) çəkin. Sonra 400 mildiyol deionlaşdırılmış suda həll etsin və pH'yi NaOH ilə tənzimləyin. Bundan sonra həlli 500 millilitr son həcmdə toplayın.
TBE'nin Fond Çözümünü Hazırlayın
54 g Tris bazası (FW = 121,14) və 27,5 q borik turşusu (FW = 61,83) ağırlığında TBE'nin konsentrasiyalı (5x) stock həlli olun və həm də təxminən 900 mililitr deionlaşdırılmış suda həll olun. Daha sonra 0.5 M EDTA (pH 8.0) 20 mililitr əlavə edin və həllini 1 litr həcmdə tənzimləyin.
Bu həll otaq temperaturunda saxlana bilər, lakin köhnə həllində bir çöküntü meydana gələcək. Tamponları şüşə qablarda saxlayaraq çöküntü yarandıqda atılsın.
TBE'nin bir iş həllini hazırlayın
Agaroz jel elektroforez üçün TBE tamponu 0.5x konsentrasiyasında (konsentratlaşdırılmış ehtiyatın 1:10 seyreltilməsi) istifadə edilə bilər. Səhra həllini 10x deionlaşdırılmış suda süzün. Son həll konsentrasiyaları 45 mM Tris-borat və 1 mM EDTA təşkil edir. Tampon artıq agaroz jelində istifadə etmək üçün hazırdır.
Sənə nə lazımdır
TBE tamponunu etmək üçün yalnız dörd maddəyə ehtiyacınız olacaq. Bu siyahıda qalan maddələr avadanlıqdır. Lazım olan dörd maddə EDTA disodyum tuzu, Tris əsas, borik turşusu və deionlaşdırılmış sulardır.
Avadanlıqlara gəldikdə, uyğun olaraq pH metri və kalibrləmə standartlarına ehtiyacınız olacaq. Bununla yanaşı 600 millilitrlik və 1500 millilitr çanta və ya çanta lazımdır. Sizin avadanlıq ehtiyaclarını yuvarlaqlaşdırmaq silindrlər və qarışdırmaq barları və qarışdırıcı plitələr bitirmişdir.
Başlamadan əvvəl lazım olan hər şeyə sahib olduğunuzdan əmin olmaq üçün istifadə edəcəyi laboratoriyaya inventar edin. Düzgün materiallardan qaçdığınız üçün həllin hazırlanmasının ortasında dayanmaqdan daha pis bir şey yoxdur.
Sizin laboratoriyanız məktəbdə və ya iş yerinizdə olarsa, səhmdəki bütün əşyaların olduğunu görmək üçün müvafiq işçilərlə əlaqə saxlayın. Bunu edərkən sonunda vaxt və enerjinizi xilas edə bilərsiniz.