Polimeraz zəncirinin reaksiya (PCR) nədir?

PCR, polimeraz zənciri reaksiyasını , DNT polimeraz enzimlərini nəzarətli şərtlərdə istifadə edərək, bir neçə nüsxə çıxararaq, DNT-nin gücləndirici seqmentləri üçün molekulyar biologiya üsulunu nəzərdə tutur. Bir DNT seqmentinin və ya geninin bir nüsxəsi milyonlarla nüsxədə klonlaşdırıla bilər və boyalar və digər görmə üsullarını aşkarlaya bilər.

1983-cü ildə inkişaf etdirilən PCR prosesi, DNT sıralamasını yerinə yetirmək və fərdi genlərdə nükleotidlərin əmrini müəyyənləşdirməyə imkan verdi.

Metod DNT-nin əriməsi və təkrarlanması üçün istilik dövründən və ya təkrarlanan istilik və soyuqdan istifadə edir. PCR davam edərkən, "yeni" DNT çoğalma üçün bir şablon kimi istifadə edilir və zəncirvari reaksiya meydana gətirir, DNT şablonunu artımla artırır.

PCR üsulları protein mühəndisliyi , klonlama, məhkəməlik (DNT barmaq izi), atalıq testi, irsi və / və ya yoluxucu xəstəliklərin diaqnozu və ətraf mühit nümunələrinin təhlili daxil olmaqla bir çox sahələrdə tətbiq olunur.

Məhkəmə ekspertizasında, xüsusilə də, PCR xüsusilə faydalıdır, çünki o, ən az DNT sübutunu gücləndirir. PCR də minlərlə ildən ibarət olan DNT-i təhlil etmək üçün istifadə edilə bilər və bu üsullar 800.000 illik mamontdan dünyanın hər yerindən mumiyaya qədər hər şeyi müəyyən etmək üçün istifadə edilmişdir.

PCR proseduru belədir:

• Initialization: Bu addım yalnız isti başlayan PCR tələb edən DNT polimerazları üçün vacibdir. Reaksiya 94 ilə 96 ° C arasında qızdırılır və 1-9 dəqiqə təşkil edir.

• Denatürasiya: Əgər prosedur başlamaq üçün lazım deyilsə, denatürasiya ilk addımdır. Reaksiya 20-30 saniyə 94-98 ° C-yə qədər qızdırılır. DNT şablonunun hidrogen bağları pozulur və bir telli DNT molekulları yaranır.
• Tavlama: Reaksiya temperaturu 50-65 ° C-dək aşağı olur və 20-40 saniyə təşkil edilir. Primerler tək qapalı DNT şablonlarına qarışırlar. Bu addımda temperaturu son dərəcə vacibdir. Çox isti olarsa, primer bağlana bilməz. Çox soyuq olmasa, primer qeyri-kafi ola bilər. Primer ardıcıllığı şablon sırası ilə yaxından təqib edildikdə yaxşı bir bağ meydana gəlir.

• Extension / Elongation: Bu addım zamanı temperatur polimeraz tipinə görə dəyişir. DNT polimeraz tamamilə yeni bir DNT sintezini sintez edir.
• Son uzama: Bu addım son PCR dövründən 5-15 dəqiqə 70-74 ° C səviyyəsində aparılır.
• Final hold: Bu addım isteğe bağlıdır. İstilik 4-15 ° C-də saxlanılır və reaksiyanı sərtləşdirir.

Prosedur üç mərhələdən ibarətdir:

• Üsyan amplifikasiyası: Hər bir dövr ərzində məhsul (təkrarlanan DNT-nin xüsusi parçası) ikiqat olur.
• Tənzimləmə mərhələsi: DNT polimeraz aktivliyini itirir və reaktivləri istehlak edərkən reaksiya yavaşlayır.
• Yaylası: Daha çox məhsul yığılmır.