Bu İmmünohistokimyəvi Boyama Tamponunu necə qurmaq olar?
Fosfat tamponlu salin (PBS), immunohistokimyasal (IHC) boyama üçün istifadə edilən bir tampon həllidir və tez-tez bioloji tədqiqatlarda istifadə olunur. PBS sodyum hidrogen fosfat, sodyum xlorid və bəzi hallarda kalium klorid və kalium dihidrogen fosfat ehtiva edən su bazlı bir tuzdur.
İmmünohistokimyəvi boyama
İmmünohistokimya bioloji toxumalarda antigenlərə xüsusi antikorların prinsipi istifadə edərək toxuma hissəsinin hüceyrələrində zülallar kimi antigenlərin aşkar edilməsi prosesinə aiddir.
Immunofluorescent boyama ilk immünohistokimyəvi boyama metodu idi.
Bir antigen-antikor bağlanma reaksiyasına görə flüoresan boyaları istifadə edərək antikorlar ilə birləşdikdə antijenler görünən olur. Bu proses floresan mikroskop altında müəyyən bir dalğa uzunluğunun həyəcanlandıran işıq ilə aktivləşdirildikdə baş verir.
Çözümlərin osmolarity və ion konsentrasiyaları insan bədəni ilə uyğun gəlir - onlar isotonikdir.
PBS üçün bir resept
PBS bir neçə yolla hazırlaya bilərsiniz. Bir çox formul var. Bəzilərində kalium yoxdur, bəziləri kalsium və ya maqnezium ehtiva edir.
Bu resept nisbətən asandır. 10X PBS səhmdar həlli (0.1M) üçün. Bununla belə, 1X səhmdar həlli də edə bilərsiniz və ya bu 10X reçetesiyle başlayın və 1X-ə qədər seyreltiniz.
Bütün proses təxminən 10 dəqiqə çəkir.
Tween əlavə etmək üçün bir seçim də təmin edilir.
PBS Buffer etmək lazımdır
- Sodium fosfat monobazik (susuz)
- Sodium fosfat dibazik (susuz)
- Natrium xlor
- Ölçək və gəmiləri çəkin
- Maqnetik qarışdırıcı və qarışdırıcı çubuq
- Kalibre edilmiş pH proqnozu və pH-ni tənzimləmək üçün uyğun həllər
- 1 l volumetrik şüşə
- Tween 20 (isteğe bağlı)
Fosfat tamponlu salinin necə qurulacağı (PBS)
10.9g susuz sodyum fosfat dibazik (Na2HPO4), 3.2 g susuz sodyum fosfat monobazik (NaH2PO4) və 90qq natrium xlorid (NaCl) çəkin.
Yalnız 1 litr distillə edilmiş suda məhv olun.
PH-ni 7.4-ə qədər tənzimləyin və həlli 1 l həcmində qədər olun.
İstifadədən əvvəl 10X səpin və pH bərpa edin.
1L həllinə 5mL Tween 20 əlavə edərək, 0.5% Tween 20 olan PBS həllini edə bilərsiniz.
PBS Buffer edilməsi üçün məsləhətlər
PBS həllini etdikdən sonra tamponu oda temperaturu ilə saxlayın.
Susuz olmayan reagentlər əvəz edilə bilər, lakin əlavə su molekullarını yerləşdirmək üçün hər birinin müvafiq kütləini yenidən hesablamaq lazımdır.
Fosfat tamponlu salin istifadə (PBS)
Fosfat tamponlu salin çox istifadə edir, çünki çox hüceyrələr üçün izotonik və toksik deyil. Bu maddələri sulandırmaq üçün istifadə edilə bilər və tez-tez hüceyrələrin konteynerlərini durulmaq üçün istifadə olunur. PBS biomolekulyarların qurulmasında müxtəlif üsullarla seyreltici olaraq istifadə edilə bilər, çünki içərisində olan su molekulları maddə-protein ətrafında qurulacaqdır. Bu "qurudulur" və sabit bir səthə yerləşdiriləcək.
PH hüceyrələrin məhvinə mane olmaq üçün davamlı və ardıcıl qalır.
Maddəni bağlayan nazik su filmi denatürasyonun və ya digər konformasiya dəyişmələrinin qarşısını alır. Karbonat tamponları eyni məqsəd üçün istifadə edilə bilər, lakin daha az effektivliyə malikdir.
PBS həmçinin ellipsometriyada proteinlərin adsorbsiyasını ölçərkən istinad spektrini almaq üçün də istifadə edilə bilər.