Dondurma necə - Bakterial mədəniyyəti qurutmaq (Liyofilizasiya)

Lyophilization, və ya dondurma qurutma, qısa bir laboratoriya prosedurudur

Dondurulmuş qurutma, həmçinin liyofilizasiya və ya kristallaşdırma deyilən bir suyun maye fazadan keçmədən, dondurulmuş bir suyun (və sonra vakuum altında yerləşdirildikdən sonra) bir qatı bir buxar dəyişməsinə imkan verən bir məhsuldan çıxarılması prosesidir. Buz (və ya digər dondurulmuş həlledicilər) sublimasiya prosesi vasitəsilə bir məhsuldan çıxarılır və suyun tərkibində su molekulları desorbsiya prosesindən çıxarılır.

Liyofilizasiyanın əsasları

Bakterial, göbələk, maya və digər mikroorqanizm mədəniyyətini uzun müddət saxlamaq üçün ən yaxşı yollardan biri dondurma qurutma prosesini istifadə etməkdir. Bu qısa laboratuar proseduru, kültürünüzün toplanması üçün qorunan hər hansı bir dondurucu-kurutucu ile gerçekleştirilebilir. Liyofilizasiya ən mürəkkəb və bahalı qurutma forması olduğundan, proses adətən həssas, yüksək həssas materiallara məhduddur. Dondurma ilə zədələnməmiş maddələr adətən soyuducu saxlanmanın lazımsız olmadığı üçün lyophilized ola bilər.

Bu proses üç saatdan az olmayaraq, 24 saat müddətində, mədəniyyətin artım müddəti də daxil edilə bilməz.

Liyofilizasiyanın addım-addım prosesi

1. Birincisi, LB ya da digər müvafiq qida maddəsi olan agar plastmasındakı mikroorqanizmdən bir gecə mədəniyyətini və ya qazanı bitir.

2. Sonradan ot örtüyü ilə steril kıvrımlı kapaklar hazırlayın, kepler (kauçuk tıxaclar) yuxarıya qoyulmuşdur. Avtoklavlama əvvəl boruların içərisində mədəniyyət identifikasiyası ilə çap edilmiş kağız etiketləri yerləşdirin. Alternativ olaraq, sterilliyə görə hazırlanmış örtüklü borulardan istifadə edin.

1. Plitələrə 4 mL liofilizasiya tamponu əlavə edin. Lazım olduqda, hüceyrələr steril bir cam çubuq istifadə edərək dayandırıla bilər.

2. Mədəniyyət süspansiyasını sterilizasiya edilmiş şişələrə tezliklə köçürün. Tüp başına təxminən 1,5 mL əlavə edin. Rezin qapağı ilə qoşulun.

3. Vials -20 dərəcə Celcius dondurucu ilə yerləşdirilməsi ilə idxal içərisində mədəniyyət suspenziyası dondur.

1. Mədəniyyətlər dondurulduqdan sonra dondurma qurutma maşınını buraxaraq və müvafiq temperatur və vakuum şəraitini sabitləşdirmək üçün vaxt ayıraraq hazırlayın. Bunu istifadə etdiyiniz xüsusi dondurma quruducusu markası üçün istehsalçının göstərişlərinə uyğun olaraq edin.

2. Diqqətlə və aseptik olaraq, şüşə qablarını boşaltmaların üstünə yerləşdirin, belə ki nəm dondurma qurutma prosesində qaça bilər və şişeleri dondurma qurutma kamerasına yerləşdirin. İstehsalçı təlimatlarına uyğun olaraq vakuumu kameraya tətbiq edin.

3. Mədəniyyət vaxtı tamamilə liyofilize etməyə imkan verin (quru). Bu, hər bir nümunənin həcminə və neçə nümunəyə görə bir neçə saatdan gecə-günə gələ bilər.

4. Dondurma qurutma kamerasından nümunələri istehsalçının göstərişlərinə uyğun olaraq çıxarın və dərhal kauçuk başlıqları olan şişeleri bağlayın, sonra isə kıvrım zirvələri.

5. Liyofilizasiyalı mədəniyyət kolleksiyasını otaq temperaturunda saxlayın.

Sizə lazım olan məhsullar

• Dondurucu qurutucu
• Qidalandırıcı və ya digər uyğun ağız plitələr (və mədəniyyət yetişdirən inkübatör)
• Şüşə çubuq
• Lyophilization buffer
• Kauçuk tamponları olan kıvrımlı üst şüşələr (və başqaları tətbiq etmək üçün bir kıvrım)
• Dondurucu

<sub>Referans:

SP Elmi. Dondurma qurutma əsas prinsipləri. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>